啤酒酵母是啤酒的命脉,它的优劣直接影响啤酒的质量。因此,啤酒酵母的分离选育工作至关重要,但要取得优良的菌种并将其长期使用却并非易事。哈尔滨啤酒(佳木斯佳凤)有限公司的菌种具有独特的风格,但它也有许多不足之处,如:最近酵母的死亡率偏高,导致酒的一系列不良反应,针对这个问题,公司培菌室通过分离选育,筛选出更优的菌株,解决了这个难题,现将分离选育过程简述如下:
     一、用无菌容器取发酵旺盛的二代酵母发酵液,放于4℃冰箱冷储24hr后倾去上清液。
     二、用接种环取沉淀好的中层酵母泥接种于事先处理好的10mL麦芽汁液体培养基中摇匀,然后取1mL稀释液加入9mL麦芽汁液体培养基中摇匀,依次类推,做梯度稀释。
     三、从10-4、10-5的试管中取适量注入事先倒好凝固的琼脂培养基上制平板,涂布均匀后用纸包好,倒置于25℃培养箱中培养3至4天。
     培养期间应每天观察菌落生长情况,剔除不理想的平板,待菌落生长至3mm时,进行挑选菌落。每个平板的菌落应在20至30个之间,菌落过多,影响酵母菌对营养成分的吸收,会造成营养不良。选取的菌落应呈乳白色,表面光滑、湿润,边缘较整齐且中等偏大。不要选取偏大或偏小的菌落,因为偏大的菌落营养过于旺盛,性能趋向衰老,而偏小的菌落属于营养不良型的。选中的菌落在显微镜下观察应是:细胞膜薄,大小均匀,细胞质透明,空胞少。
     选中的菌落用接种环转接到斜面培养基上,并编好号码移入25℃培养箱内培养3至5天,待菌落长丰满后移入0-4℃冰箱中保存。同时将选中的菌落接种于5mL液体培养基中,放于25℃培养箱中培养24hr,然后取1mL接入150mL液体培养基中,同时接两个,放在与大生产相同的温度下培养36hr和72hr后,分别测降糖速率(见表1)。
     由表1降糖速率选出的优良菌株,进行下一步发酵试验。

 时间  1  3 4  5  6  7  8  9  10
 36HR  0.13  0.15 0.2  0.24 0.18 0.12 0.23 0.1  0.25  0.22
 72HR  0.64 0.68   0.71 0.72 0.65 0.59 0.71 0.58  0.73  0.71


     近年来,高浓度发酵已成为啤酒酿造的一个发展趋势,由于高浓度发酵能在利用原有设备的基础上,不需增加太大的投资即可使产量增加30%左右,而且在啤酒风味的稳定性方面也能更好的控制一致,因此,越来越多的厂家都趋向使用高浓度发酵以获取更大的产量和利润。所以,我们根据这一需要,决定采用高浓驯养。因为酵母有“就低不就高”的原则,即高浓酵母可以用于低浓发酵,但低浓酵母不适合高浓发酵。
     由降糖速率选中的菌株从斜面转接入10mL液体培养基中,放于25℃培养箱中培养24hr,然后再活化一次转接入100mL液体培养基中,放于20℃培养箱中培养24hr,再转接入400mL液体培养基中,置于18℃培养箱中培养24hr后移入2000mL液体培养基中,接着转入与大生产相同的温度培养。每天定时摇晃三角瓶,使酵母充分分散,促进发酵进程。发酵第二天开始测双乙酰,因为双乙酰是酵母代谢过程中产生的物质,它对啤酒的质量有重要的影响,因此,选择双乙酰还原快的菌株也非常重要。连续测4天双乙酰,找出各菌株的峰值(见表2)。

 号  3  7  9 10 
 峰值  0.48  0.47  0.42  0.5  0.43


  发酵结束后检测各菌株的发酵度、双乙酰及凝聚性(见表3)。

 号  3  7  9 10 
 发酵度%  67.5  66.9  68.7 67.6   68.3
 双乙酰  0.1  0.12  0.07  0.11  0.08
 凝聚性  0.35  0.41  0.32  0.42  0.36


     由此筛选出发酵度高、降糖快、双乙酰还原快、凝聚性较强的理想菌株。进一步测死亡率及死灭温度,死灭温度均为52℃。死亡率如下(见表4)。

 号  3  7  10
 死亡率% 1.81   2.56 1.37   2.0 3.1 
     由表4可知,选出的理想菌株进行第二次分离选育。在选育过程中根据酵母菌种的不同,可以在培养基中适当添加酵母所需的营养盐。

 


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